1.酶切前确定待切样品的浓度, 并选择合适的限制性内切酶和配套 Buffer。

2. 在离心管中加入如下成分：

10×Buffer

1ul

待切样品

xul

酶

0.5-1ul

加水补足 10ul

3. 混匀样品并短暂离心使样品沉于管底。

4. 将离心管置于 37℃中温育 1-3hr，若待切样品为 PCR 产物，则可将反应时间适当延长。

5. 用未酶切的质粒作为对照，琼脂糖电泳鉴定酶切结果。

注：当酶切样品用于回收而不是鉴定时，可按比例适当加大反应体积。双酶切可选用二者活性都较高的 Buffer 或者通用 Buffer，但要注意不能有星反应。