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m6A RNA甲基化定量试剂盒(P-9005)中文说明书及常见问题解答

发布者:艾美捷科技    发布时间:2021-08-05     
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在之前的文章中,我们复盘了m6A甲基化疑难杂症&治疗方法

 

N6-甲基腺嘌呤(m6A)是真核生物最常见和最丰富的RNA分子修饰,占所有 RNA 甲基化的 80% 以上。随着RNA甲基化研究越来越热,科学研究界刮起了一阵m6A RNA甲基化研究的飓风。站在风口的研究学者们,都选择了Epigentek品牌的P-9005产品EpiQuik M6A RNA Methylation Quantification Kit(M6A RNA甲基化定量检测试剂盒)

EpigentekM6A RNA甲基化定量检测试剂盒.jpg

 

试剂盒原理

P-9005使用独家配方试剂使RNA被高效的结合吸附在微孔板上。使用特异性捕获 N6-甲基腺苷抗体和检测抗体检测 N6-甲基腺苷 (m6A)。检测到的信号得到增强,然后通过读取微孔板分光光度计中 450 nm 波长的吸光度进行比色定量。m6A 的量与测得的 OD 强度成正比。

 

P-9005-中文说明书链接

 

常见问题解答

 

在使用P-9005试剂盒的过程中,客户往往会提出各种问题,小艾这里整理了一下常见的四大类FAQ。

 

一、实验样品类


1.试剂盒样品有没有种属限制?

解答:P-9005试剂盒没有种属限制,但是需要是提取好的RNA样品。

 

2.RNA样品纯度要求和输入量?

解答:RNA纯度要求:A260/280>1.9;A260/230>1.7。无DNA污染;另外RNA序列长度大于80nts,以便RNA可以较好的结合在板上。

RNA输入量:对于每次实验RNA的输入量是100-300ng。最为理想的RNA的输入量应该是200ng,正如我们所知m6A通常不到总RNA的0.1%。

 

二、试剂盒类


1.有效期是多久?

解答:客户收到货后,有效期6个月。

 

2.P-9005试剂盒里的组分是否可以单独购买吗?

解答:可以单独购买,但是建议客户购买完整试剂盒。

 

3.在Date Sheet中,它没有告诉我们应该使用什么样的材料来避免RNase,RNase是否会影响这个试剂盒的结果?

解答:实验中涉及到的试剂都是不含RNase的,而且当RNA结合在板上后,RNase将不会再影响实验结果。

 

4.客户的缓冲液是50mM的PH8的tris-盐酸缓冲液,可以用这个缓冲液分装吗?

解答:尽量推荐使用与厂家相同配方的溶液进行分装。其他溶度的缓冲液是否可用,需要客户自行尝试。

 

三、产品说明书类

 

1.试剂盒孔板数指的是可以检测的样品数量吗?

解答:48/96孔试剂盒只能做48/96个test,而不是48/96个样品。相应的试剂会比48孔稍微多一点,因为要考虑到加样损耗的因素。

 

2.加样时RNA样品体积多少合适?

解答:在与RNA的结合过程中,建议的200ngRNA的样本量体积在1-8uL,这样才能保证最佳的结合效率。

 

3.抗体稀释比例是多少?

解答:CA和DA的原始浓度都是1000X,但是稀释倍数不同,CA按照1:1000稀释,DA按照1:2000稀释,加大DA的稀释比例降低背景信号。

 

4.P-9005做m6A甲基化的话,为什么要用带滤芯的枪头?还有在第4步,m6A RNA捕获时,洗涤的操作溶液是直接用枪头吸掉呢,还是可以直接倒掉?

解答:这里使用带滤芯枪头,目的是最大限度避免移液器带来的交叉污染。如果客户操作无误,用普通枪头也是可以的;使用手动移液器代替典型的板轻拂/倾倒方法,以确保完全去除缓冲液并最大程度减少孔间污染。注意,将移液枪沿孔的一侧慢慢向底部引导,避免刮擦到孔底表面。

 

5.加入80ul的结合液后,再加入RNA,孵育90min后,将BS移除,这时候RNA在哪?

解答:RNA被高效RNA结合液结合在孔板底表面。八联管孔底表面有预涂处理,带正电,RNA的磷酸骨架带负电,在BS结合液(Binding Solution)的作用下,带负电的RNA可以稳定的结合在板上。

 

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